銘修生物實驗室-空腸彎曲菌的鑒定

5.4.1.1 概述 挑取5個（如少于5個則全部挑取）或更多的可疑菌落接種到哥倫比亞血瓊脂平板上，微需氧條件下42 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h～48 h，按照5.4.1.1～5.4.1.5進行鑒定，結(jié)果符合表1的可疑菌落確定為彎曲菌屬。 表1 彎曲菌屬的鑒定項目 彎曲菌屬特性 形態(tài)觀察 革蘭氏陰性，菌體彎曲如小逗點狀，兩菌體的末端相接時呈S形、螺旋狀或海鷗展翅狀a 動力觀察 呈現(xiàn)螺旋狀運動b 氧化酶試驗 陽性 微需氧條件下25 ℃±1 ℃生長試驗 不生長 有氧條件下42 ℃±1 ℃生長試驗 不生長 a有些菌株的形態(tài)不典型。 b有些菌株的運動不明顯。 5.4.1.2 形態(tài)觀察 挑取可疑菌落進行革蘭氏染色，鏡檢。5.4.1.3 動力觀察 挑取可疑菌落用1mL 布氏肉湯懸浮，用相差顯微鏡觀察運動狀態(tài)。5.4.1.4 氧化酶試驗 用鉑/銥接種環(huán)或玻璃棒挑取可疑菌落至氧化酶試劑潤濕的濾紙上，如果在10s內(nèi)出現(xiàn)紫紅色、紫羅蘭或深藍色為陽性。5.4.1.5 微需氧條件下25 ℃±1 ℃生長試驗 挑取可疑菌落，接種到哥倫比亞血瓊脂平板上，微需氧條件下25 ℃±1 ℃培養(yǎng)44 h±4 h，觀察細菌生長情況。5.4.1.6 有氧條件下42 ℃±1 ℃生長試驗 挑取可疑菌落，接種到哥倫比亞血瓊脂平板上，有氧條件下42 ℃±1 ℃培養(yǎng)44 h±4 h，觀察細菌生長情況。5.4.2 空腸彎曲菌的鑒定 5.4.2.1 過氧化氫酶試驗 挑取菌落，加到干凈玻片上的3%過氧化氫溶液中，如果在30s內(nèi)出現(xiàn)氣泡則判定結(jié)果為陽性。5.4.2.2 馬尿酸鈉水解試驗 挑取菌落，加到盛有0.4 mL 1%馬尿酸鈉的試管中制成菌懸液。混合均勻后在36 ℃±1 ℃水浴中溫育2 h或36 ℃±1 ℃培養(yǎng)箱中溫育4 h。沿著試管壁緩緩加入0.2 mL茚三酮溶液，不要振蕩，在36 ℃±1 ℃的水浴或培養(yǎng)箱中再溫育10 min后判讀結(jié)果。若出現(xiàn)深紫色則為陽性；若出現(xiàn)淡紫色或沒有顏色變化則為陰性。5.4.2.3 吲哚乙酸酯水解試驗 挑取菌落至吲哚乙酸酯紙片上，再滴加一滴滅菌水。如果吲哚乙酸酯水解，則在5 min～10 min內(nèi)出現(xiàn)深藍色；若無顏色變化則表示沒有發(fā)生水解?？漳c彎曲菌的鑒定結(jié)果見表2。 表2 空腸彎曲菌的鑒定特征 空腸彎曲菌 （C. jejuni） 結(jié)腸彎曲菌 （C. coli） 海鷗彎曲菌 （C. lari） 烏普薩拉彎曲菌 (C. upsaliensis) 過氧化氫酶試驗 ＋ ＋ ＋ －或微弱 馬尿酸鹽水解試驗 ＋ － － － 吲哚乙酸脂水解試驗 ＋ ＋ － ＋ 注：＋表示陽性；－表示陰性。