細(xì)菌的不同顯色反應(yīng)是由于細(xì)胞壁對(duì)乙醇的通透性和抗脫色能力的差異，主要是肽聚糖層厚度和結(jié)構(gòu)決定的。經(jīng)結(jié)晶紫染色的細(xì)胞用碘液處理后形成不溶性復(fù)合物，乙醇能使它脫色。在革蘭陰性細(xì)胞染色中，乙醇或丙酮破壞了胞壁外膜、損傷肽聚糖層和細(xì)胞質(zhì)膜，結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物從細(xì)胞中滲漏出來，當(dāng)再用其他染色液復(fù)染時(shí)，顯現(xiàn)紅色。紅色染料雖然也能進(jìn)入已染成紫色的G+細(xì)胞，但被紫色蓋沒，所以紅色顯示不出來。在革蘭陽性細(xì)胞染色中，乙醇還能使厚的肽聚糖層脫水，導(dǎo)致孔隙變小，由于結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物分子太大，不能通過細(xì)胞壁，不易脫色，所以保持著紫色。

　　冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試劑盒操作步驟（僅供參考）：

　　1、涂片：取待檢細(xì)菌，于載玻片中央涂成薄層或者或在載玻片上滴加少許無菌水，取菌與的水混合均勻，涂成一薄層。

　　2、干燥：涂片后在室溫下自然干燥，也可在酒精燈上略加溫，使之迅速干燥。

　　3、固定：手持載玻片一端，標(biāo)本面朝上，在酒精燈的火焰外側(cè)快速來回移動(dòng)3~5次，每次1s，溫度不宜過高，防止菌體蛋白變性，放置待涼后染色。也可以用甲醇或乙醇固定。

　　4、初染：滴加結(jié)晶紫染色液染色1~2min，清水沖洗去染色液。

　　5、媒染：滴加Gram碘液，并覆蓋載玻片，室溫放置1~2min，水洗。

　　6、脫色：滴加脫色液，搖動(dòng)10～30s，直至流下的脫色液不出現(xiàn)紫色時(shí)為止，立即用水沖去脫色液，終止反應(yīng)。

　　7、復(fù)染：滴加沙黃染色液染色30s~1min，水洗。

　　8、干燥。

　　9、鏡檢：置油鏡觀察。

　　冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試劑盒注意事項(xiàng)：

　　1、涂片之前，應(yīng)事先在背面做好圓圈標(biāo)記，以便判斷后續(xù)試驗(yàn)的位置。

　　2、取細(xì)菌時(shí)，應(yīng)注意自我防護(hù)，拔或塞試管塞時(shí)，應(yīng)將試管口通過火焰略加燒灼，zui后將接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌。

　　3、加熱固定涂片時(shí)，應(yīng)注意玻片勿太靠近火焰，一般要求玻片溫度不超過60℃，以玻片背面觸及手背皮膚不覺過燙為宜。

　　4、革蘭氏染色的關(guān)鍵在于嚴(yán)格掌握脫色程度，脫色時(shí)間應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)判斷。脫色過度，陽性菌可被誤染為陰性菌；脫色不夠，陰性菌可被誤染為陽性菌。

　　5、待檢細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間也會(huì)影響染色效果，陽性菌培養(yǎng)時(shí)間過長或已死亡或細(xì)菌溶解，都常呈陰性反應(yīng)。

　　6、上述試劑均對(duì)人體有刺激性，請注意適當(dāng)防護(hù)。