活體細胞線粒體內(nèi)膜功能/膜電位紅色熒光(TMRE)測定試劑盒產(chǎn)品說明書
(中文版)
主要用途
活體細胞線粒體內(nèi)膜功能/膜電位紅色熒光(TMRE)測定試劑是一種旨在通過四甲基羅丹明乙酯染料,選擇性地聚集在活性線粒體內(nèi)呈現(xiàn)熒光染色,其熒光的增強或減弱說明線粒體膜電位的變化,即內(nèi)膜電負性的增高或降低,來分析線粒體內(nèi)膜功能的完整性的*而經(jīng)典的技術方法。該技術經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種線粒體制備物的功能檢測。可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、衰老等的研究。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,活體檢測,操作簡易,性能穩(wěn)定。
技術背景
四甲基羅丹明乙酯(tetramethylrhodamin e ethyl ester;TMRE),為羅丹明衍生物陽離子染料,作為電勢測定(potentiometric)熒光探針:*具有親脂性和可逆性,且細胞低毒和光穩(wěn)定; 第二,與線粒體內(nèi)膜負電極結合而聚集;第三,容易進入細胞及其線粒體。四甲基羅丹明乙酯進入細胞后,被細胞內(nèi)酯酶切離,產(chǎn)生四甲基羅丹明。四甲基羅丹明進入線粒體后,被線粒體俘獲,分布和結合在線粒體內(nèi)膜上,呈現(xiàn)強烈熒光。線粒體膜電位的高低變化決定了TMRE的分布濃度。電位高,TMRE在線粒體的濃度高,顯示為強力紅色或桔紅色;反之,TMRE彌散在胞漿內(nèi),熒光減弱表明線粒體膜電位受到損害。 與TMRM染料相比,較為疏水或親脂性。
產(chǎn)品內(nèi)容
染色液(Reagent A) 100微升
稀釋液(Reagent B) 10毫升
清理液(Reagent C) 50毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存 清理液(Reagent C)在4℃冰箱里,其余的保存在-20℃冰箱里; 染色液(Reagent A)避免光照;有效保證6月
用戶自備
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(GMS12024):用于細胞脫離
*細胞培養(yǎng)液(GMS12052):用于細胞脫落收集
1.5毫升離心管:用于活體細胞線粒體染色的容器
微型臺式離心機:用于細胞收集的操作
培養(yǎng)箱:用于染色孵育
(共聚焦)熒光顯微鏡:用于活體細胞線粒體熒光定性分析
比色皿或96孔板:用于熒光定量分析的容器
熒光分光光度儀或熒光酶標儀:用于活體細胞線粒體熒光定量分析
細胞流式儀:用于活體細胞線粒體熒光分析
實驗步驟
實驗開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的 染色液(Reagent A)置入冰槽里融化, 稀釋液(Reagent B)放進37℃恒溫水槽里預熱。然后移出10微升 染色液(Reagent A)到新的1.5毫升離心管,加入890微升 稀釋液(Reagent B),混勻后,在冰槽里靜置,并標記為 染色工作液,放在暗室里。然后進行下列操作。
一、直接法
亮橘紅色熒光;如果強度顯著減弱,表明線粒體膜電位受到破壞
二、間接法
選擇一、(共聚焦)熒光顯微鏡觀察
選擇二、細胞流式儀分析
激發(fā)波長 | 488nm |
匹配熒光染料 | 藻紅蛋白(phycoerythrin;PE) |
熒光顏色 | 紅色 |
散發(fā)波長 | 575 |
流式儀通道 | FL2 |
熒光增強 | 膜電位正常 |
選擇三、熒光分光光度儀或熒光酶標儀測定
注意事項
2)細胞流式儀:上圖為正常樣品;下圖為FCCP處理樣品
質(zhì)量標準
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