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小鼠核酸氧化8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA分析試劑盒

更新時(shí)間:2019-08-14  |  點(diǎn)擊率:1383

 小鼠核酸氧化8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA分析試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書

(中文版)

 

主要用途

 

 小鼠核酸氧化8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA分析試劑是一種旨在使用單克隆抗8-羥基脫氧鳥苷抗體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合樣品中的8-羥基脫氧鳥苷,進(jìn)而使用辣根過(guò)氧化酶綴合二抗,由生色染料四甲基聯(lián)苯胺參與反應(yīng),呈現(xiàn)黃色產(chǎn)物,即通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(ELISA)比色法定量評(píng)價(jià)DNA損傷水平的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于各種小鼠細(xì)胞和組織裂解產(chǎn)物,以及體液樣品8-羥基脫氧鳥苷的定量分析。廣泛用于細(xì)胞衰老、細(xì)胞凋亡、腫瘤等的研究。產(chǎn)品即到即用,反應(yīng)敏感,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,顯色清晰。

 

技術(shù)背景

 

核酸氧化損傷(nucleotide oxidative damage),包括DNA和RNA損傷,是由于環(huán)境因子或細(xì)胞代謝影響,在逃避細(xì)胞防御機(jī)制的前提下,所產(chǎn)生的四種損傷之一:氧化、烷化(alkylation)、水解和堿基錯(cuò)配損傷等。而氧化損傷主要通過(guò)活性氧族(reactive oxygen species;ROS),包括超氧自由基陰離子superoxide radical;O2-)、過(guò)氧化氫(hydrogen peroxide;H2O2)、羥自由基或氫氧基(hydroxyl radical;OH-)、過(guò)氧peroxyl radical;ROO-)、氫過(guò)氧自由基hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxyl radical)、氮氧基(nitric Oxide;NO-、過(guò)氧亞硝基陰離子peroxynitrite anionONOO-)等的作用,使堿基羥基化和嘌呤環(huán)裂開,誘導(dǎo)鳥嘌呤(guanine;G)向胸腺嘧啶(thymine;T)的顛換(transversion),造成體細(xì)胞基因突變,影響細(xì)胞周期、基因轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞凋亡等,終導(dǎo)致各種疾病的發(fā)生,例如糖尿病、高血壓、中風(fēng)、癌癥、衰老等。其中核酸損傷產(chǎn)物8-羥基脫氧鳥苷(8-hydroxy-2-deoxyguanosine;8-OHdG)作為DNA損傷的分子標(biāo)志;8-羥基鳥苷(8-hydroxyguanosine)作為RNA損傷的分子標(biāo)志。8-羥基脫氧鳥苷是常見的DNA損傷產(chǎn)物,也是氧化應(yīng)急的生物標(biāo)志。通過(guò)使用酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(enzyme-linked immunosorbent assay;ELISA),即基于單克隆抗8-羥基脫氧鳥苷抗體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合樣品中的8-羥基脫氧鳥苷,進(jìn)而使用辣根過(guò)氧化酶綴合二抗,由生色染料四甲基聯(lián)苯胺(3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine,TMB)參與反應(yīng),呈現(xiàn)黃色產(chǎn)物,在分光光度儀下(450nm波長(zhǎng)),定量檢測(cè)8-羥基脫氧鳥苷的含量。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

 標(biāo)記液(Reagent A)         

 酶促液(Reagent B)    毫升

 清理液(Reagent C)    毫升

 底物A(Reagent D)    毫升

 底物B(Reagent E)    毫

 終止液(Reagent F)    

 標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G)    毫升

 抗體酶標(biāo)板 96孔

產(chǎn)品說(shuō)明書 1份

 

 

保存方式

 

保存在4冰箱里;暫時(shí)不用,保存在-20箱里; 底物B(Reagent E)易揮發(fā),密閉瓶蓋,避免光照; 抗體酶標(biāo)板,密封干燥保存;有效保證6月

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管:用于工作液配制

培養(yǎng)箱:用于反應(yīng)孵育

酶標(biāo)儀:用于比色分析

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

實(shí)驗(yàn)開始前,將-20℃或4冰箱里試劑盒中的試劑置于室溫下30分鐘均衡溫度。然后進(jìn)行下列操作:

  • 標(biāo)準(zhǔn)樣品管濃度表:

 標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent G

 標(biāo)準(zhǔn)8-羥基鳥苷濃度

G1

xx克/毫升

G2

xx克/毫升

G3

xx克/毫升

G4

xx克/毫升

G5

xx克/毫升

G6

0

 

  • 標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測(cè)樣品測(cè)定
  • 準(zhǔn)備1個(gè) 抗體酶標(biāo)板:標(biāo)記好空白對(duì)照、標(biāo)準(zhǔn)樣品、待測(cè)樣品
  • 加入50微升用戶自備的無(wú)離子水到空白對(duì)照孔里
  • 分別加入xx微升 標(biāo)準(zhǔn)液G1至G6到對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)樣品孔里
  • 加入50微升待測(cè)樣品到待測(cè)樣品孔里
  • 加入xx微升 標(biāo)記液(Reagent A)到待測(cè)樣品孔里
  • 分別加入xx微升 酶促液(Reagent B)到標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測(cè)樣品孔里
  • 搖動(dòng)酶標(biāo)板,充分混勻
  • 密封酶標(biāo)板
  • 進(jìn)37培養(yǎng)箱里孵育60分鐘(注意:培養(yǎng)箱保持濕潤(rùn),避免干化)
  • 小心抽去上清液
  • 加入xx微升 清理液(Reagent C)
  • 室溫下孵育10秒
  • 小心抽去清理液(注意:確保沒有液體殘留)
  • 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟11至13四次
  • 準(zhǔn)備1個(gè)1.5毫升離心管
  • 分別加入等量的 底物液A(Reagent D) 底物液B(Reagent E),混勻
  • 加入xx微升上述配制的 底物工作液到標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測(cè)樣品孔里
  • 室溫下孵育15分鐘,避免光照(注意:可見藍(lán)色沉淀
  • 加入xx微升 終止液(Reagent F),混勻(注意:可見藍(lán)色變成黃色
  • 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀測(cè)讀:450nm波長(zhǎng)(注意:不宜超過(guò)30分鐘)
  • 構(gòu)建8羥基脫氧鳥苷標(biāo)準(zhǔn)曲線:縱座標(biāo)(Y軸)為吸光值(OD);橫坐標(biāo)(X軸)為8-羥基脫氧鳥苷濃度(納克/毫升)
  • 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)8-羥基脫氧鳥苷濃度納摩爾/毫升)

 

注意事項(xiàng)

 

  • 本產(chǎn)品為96次操作量
  • 本產(chǎn)品檢測(cè)敏感度達(dá)0.01納克/毫升
  • 操作時(shí),須戴手套
  •  抗體酶標(biāo)板可以拆卸,用戶根據(jù)實(shí)際需求,選擇需要的孔板
  • 系統(tǒng)操作時(shí),標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)定只需一次
  • 孵育時(shí),須避免光照
  • 加樣時(shí)確保加入孔底,避免濺出和氣泡
  • 注意加樣時(shí),避免交叉污染,避免污染母液
  • 建議使用濕度充分的培養(yǎng)箱
  • 用戶根據(jù)實(shí)際用量,配制 底物工作液;須新鮮配制,即刻使用
  • 建議染色完成后,即刻進(jìn)行比色分析
  • 本公司提供系列核酸損傷檢測(cè)試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感

 

 

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