銘博（上海）生物實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)時(shí)間 | 如何做好 WB 實(shí)驗(yàn)？

蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot ）可以

• 從蛋白質(zhì)混合物中檢出目標(biāo)蛋白質(zhì)；

   

• 定量或定性確定細(xì)胞或組織中蛋白質(zhì)的表達(dá)情況；

   

• 用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-RNA 相互作用后續(xù)分析。

Western 免疫印跡（Western Blot）原理

是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測(cè)的方法。對(duì)已知表達(dá)蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)新基因的表達(dá)產(chǎn)物，可通過(guò)融合部分的抗體檢測(cè)。

與 Southern 或 Northern 雜交方法類似，但 Western Blot 采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測(cè)物是蛋白質(zhì)，「探針」是抗體，「顯色」用標(biāo)記的二抗。

經(jīng)過(guò) PAGE 分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜） 上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。

以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。