本文是公司專業(yè)人員總結(jié)的關(guān)于人凝血因子Ⅲelisa試劑盒的操作步驟經(jīng)驗總結(jié)，以作為參考希望能夠幫助到大家。
1、人凝血因子Ⅲelisa試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉；
2、加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻；
3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘；
4、配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用；
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干；
6、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外；
7、溫育：操作同3；
8、洗滌：操作同5；
9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘；
10、人凝血因子Ⅲelisa試劑盒的終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）；
11、測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值，測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
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