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人凝血因子Ⅲelisa試劑盒采用的技術(shù)工作

更新時(shí)間:2019-07-10  |  點(diǎn)擊率:1263
   人凝血因子Ⅲelisa試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法,例如:ELISA檢測(cè)試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見(jiàn)的叫法是ELISA檢測(cè)試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等。
 
  人凝血因子Ⅲelisa試劑盒原理很簡(jiǎn)單,蘇木素染色法也是常用的一種染色方法。木素染色后的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色,細(xì)胞漿呈現(xiàn)粉紅色或紅色。染色液也可以重復(fù)使用,直至認(rèn)為效果不佳時(shí)再換用新的染色液。
 
  人凝血因子Ⅲelisa試劑盒內(nèi)質(zhì)呈淡藍(lán)黑色,外質(zhì)收縮,剩下部分不著色或色澤更淺。圓形細(xì)胞核呈藍(lán)黑色。居中的核仁呈黑色小圓點(diǎn)。核膜較薄,其內(nèi)側(cè)緣均勻,整齊地排列著一層細(xì)小的染色質(zhì)粒。核仁與核膜之間可見(jiàn)到核網(wǎng)。被吞噬的紅細(xì)胞呈藍(lán)黑色采用蘇木素染色液進(jìn)行免疫染色后的復(fù)染,操作步驟簡(jiǎn)便,操作時(shí)間短??梢圆僮鞑襟E簡(jiǎn)便,操作時(shí)間短或培養(yǎng)細(xì)胞的染色,或與免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光、原位雜交等配合使用。使用蘇木素染色液染色后還可以進(jìn)行免疫染色或其它染料的復(fù)染。
 
  人凝血因子Ⅲelisa試劑盒時(shí)間的把握?
 
  (1)蘇木素復(fù)染時(shí)間要看當(dāng)時(shí)的室溫、溶液的新舊、目標(biāo)抗原的定位等情況,一般數(shù)秒-數(shù)分鐘。不過(guò)這個(gè)如果染色不理想可以補(bǔ)救的。即:染色深則分化時(shí)間稍長(zhǎng)些即可;染色淺則再置于蘇木素中染色即可。
 
 ?。?)鹽酸酒精是分化,氨水是返蘭。作用不同。片子復(fù)染完后流水振洗,然后置于鹽酸酒精中數(shù)秒(一定動(dòng)作要快)后拿出流水振洗,在放入氨水中返蘭即可。
 
 ?。?)如果分化的顏色過(guò)淺,可以復(fù)置于蘇木素中染色。
 
  精漿檸檬酸定量試劑盒能夠快速測(cè)定淀粉質(zhì)原料中淀粉含量,它具有速度快、可重復(fù)性強(qiáng)、安全、便捷等優(yōu)點(diǎn),主要設(shè)計(jì)用于發(fā)酵過(guò)程中淀粉質(zhì)類總糖的快速分析與測(cè)定。精漿檸檬酸定量試劑盒經(jīng)過(guò)修訂操作步驟后,還可以用于葡萄糖濃度的測(cè)定與分析。
 
  人凝血因子Ⅲelisa試劑盒注意事項(xiàng)
 
  1、 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)粉末溶解于蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液后,即獲得蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液,該原液中含有防腐劑,不影響后續(xù)檢測(cè),該蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液-20℃長(zhǎng)期保存。
 
  2、 待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中,蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中,否者待測(cè)蛋白不蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致,有可能導(dǎo)致測(cè)定不準(zhǔn)確。
 
  3、 待測(cè)蛋白和蛋白標(biāo)準(zhǔn)加入 BCA 工作液后,如果發(fā)現(xiàn)檢測(cè)效果不佳,精漿檸檬酸定量試劑盒可以室溫放置 2h或 60℃放置 30min,顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深。顯色反應(yīng)也會(huì)隨溫度升高而加快。如果濃度較低,可以適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間或在較高溫度下孵育。
 
  4、 測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒(méi)有明顯變化,可能的原因是樣品中含有嚴(yán)重干擾 BCA 法測(cè)定蛋白濃度的物質(zhì)。
 
  5、 建議每次測(cè)定時(shí)都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因?yàn)?BCA 法測(cè)定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深,并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān),所以除非控制顯色反應(yīng)的時(shí)間和溫度,否則如需測(cè)定宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
 
  6、 如果沒(méi)有酶標(biāo)儀,也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定,但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的小檢測(cè)體積。應(yīng)按比例適當(dāng)加大 BCA 工作液的用量使總體積不小于小檢測(cè)體積,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量亦相應(yīng)按比例放大。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí),每個(gè)試劑盒可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少。
 
  7、 人凝血因子Ⅲelisa試劑盒為了加快 BCA 法測(cè)定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)加熱,但是切勿過(guò)熱,否則易失效。
 
  8、 BCA 法檢測(cè)中樣本中不應(yīng)含有 EGTA,否則影響檢測(cè)結(jié)果。
 
  9、 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
 
  人凝血因子Ⅲelisa試劑盒自從60-70年代問(wèn)世以來(lái),得到*科研工作者的認(rèn)可及推崇,在歐美及中國(guó)獲得很大的推廣,尤其是國(guó)內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展。
 
  人凝血因子Ⅲelisa試劑盒是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。ELISA檢測(cè)試劑盒適用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測(cè)。
 
  免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),所以任何的診斷試劑離不開(kāi)的原料,如抗原抗體,酶等。以前用于免疫測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體,而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過(guò)各種化學(xué)合成方法制備。近年來(lái),隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑,各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn)。
 
  HBsAg試劑特點(diǎn)(檢測(cè)模式:臨床抗體夾心法):包被抗體為山羊多抗。多抗具有高親和性和對(duì)抗原各種表位的反應(yīng)性。酶表抗體為與HBsAg有不同結(jié)合位點(diǎn)的鼠復(fù)合單位,可測(cè)得HBsAg變異樣品,提高檢測(cè)的特異性(99.98%)提高檢測(cè)的靈敏度,應(yīng)用Parl Ehrich 學(xué)說(shuō)(PEI)HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)ad標(biāo)準(zhǔn)品的靈敏度為0.05ng/ml對(duì)ay標(biāo)準(zhǔn)品靈敏度為0.025ng/ml
 
  人凝血因子Ⅲelisa試劑盒應(yīng)用定性?shī)A心免疫檢測(cè)技術(shù),用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國(guó)型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段,分別來(lái)自于該毒株的開(kāi)放閱讀框2和開(kāi)放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗體,這些抗體就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。
 
  然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過(guò)氧化物酶)酶結(jié)合物,經(jīng)第二次孵育后,酶結(jié)合物就會(huì)與次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合,洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng),只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng),并在波長(zhǎng): 450nm處測(cè)量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn), O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽(yáng)性。
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