準(zhǔn)確靈敏：試管法檢測(cè)范圍為 20 - 2000 μg/ml，如果在 60℃進(jìn)行增色反應(yīng)，檢測(cè)范圍可達(dá) 5 - 250 μg /ml；微孔板法的檢測(cè)范圍為 25 - 500 μg/ml。

 

　　操作簡(jiǎn)單：所需樣品少，檢測(cè)試劑少，操作簡(jiǎn)捷，30 分鐘內(nèi)完成測(cè)定。

 

　　兼容性好：不受樣品中大多數(shù)離子型和非離子型表面活性劑的影響。

 

　　穩(wěn)定性好：BCA 試劑 （A 和 B）在室溫可穩(wěn)定保存 12 個(gè)月；BCA 工作液可在室溫穩(wěn)定保存一周；顯色反應(yīng)產(chǎn)物在 1 小時(shí)內(nèi)比色測(cè)定，吸收值穩(wěn)定。

 

　　使用方便：提供微孔板法和試管法測(cè)定兩種檢測(cè)方法，方便用戶選擇。

 

　　精漿檸檬酸定量試劑盒使用方法

 

　　1. 按需用量配制適量BCA工作液 （可在室溫穩(wěn)定保存一周）。BCA試劑A與BCA試劑B以體積比50:1混合，充分混勻。

 

　　2. 配制標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液（參照附表2配制），并以蒸餾水作為空白對(duì)照。

 

　　3. 將樣品作適當(dāng)稀釋，稀釋液需與標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液一致，可用1 × PBS或蒸餾水進(jìn)行稀釋，樣品建議作梯度倍比稀釋，如2倍、4倍、8倍等稀釋。

 

　　4. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案，選擇以下其中一種方法進(jìn)行測(cè)試。

 

　　4.1微孔板法

 

　?、?分別取20 μl不同濃度標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液、待測(cè)樣品以及空白對(duì)照（蒸餾水）分別置于各孔，為測(cè)定準(zhǔn)確每個(gè)加樣孔均應(yīng)做復(fù)孔。

 

　　⑵ 每孔分別加入200 μl BCA工作液，輕微震蕩混勻，動(dòng)作不可劇烈，避免交叉污染。

 

　　⑶ 封上微孔板，放置37℃反應(yīng)30分鐘 （對(duì)于低濃度樣品的檢測(cè)也可37℃反應(yīng)2小時(shí)，以提高562 nm波長(zhǎng)吸收值，增強(qiáng)檢測(cè)靈敏度）。

 

　?、?取出微孔板恢復(fù)至室溫，采用 562 nm 波長(zhǎng)酶標(biāo)儀比色。

 

　?、?計(jì)算出每孔標(biāo)準(zhǔn)蛋白和待測(cè)樣品的實(shí)際吸收值（即標(biāo)準(zhǔn)品吸收值－空白平均吸收值），然后計(jì)算出復(fù)孔平均吸收值。

 

　?、?繪制標(biāo)準(zhǔn)蛋白曲線。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸公式，計(jì)算出待測(cè)樣品的蛋白濃度。

 

　　4.2 試管法

 

　　⑴ 分別取50 μl不同濃度標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液、待測(cè)樣品以及空白對(duì)照（蒸餾水）置于1.5 ml干凈的Eppendorf管，并作好標(biāo)記（建議每管均應(yīng)做2 - 3個(gè)平行反應(yīng)）。

 

　?、?每管分別加入1 ml BCA工作液，立即混勻。

 

　?、?放置37℃反應(yīng)30分鐘（如果放置60℃反應(yīng)30分鐘，低檢測(cè)蛋白濃度可達(dá)5 μg/ml）。

 

　?、?試管恢復(fù)至室溫，采用562 nm波長(zhǎng)比色（使用0.5厘米光程比色杯），以空白對(duì)照管調(diào)零，然后進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)蛋白和待測(cè)樣品比色測(cè)定。

 

　?、?計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)蛋白與待測(cè)樣品復(fù)管平均吸收值。

 

　?、?繪制標(biāo)準(zhǔn)蛋白曲線。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸公式，計(jì)算出待測(cè)樣品的蛋白濃度。

 

　　精漿檸檬酸定量試劑盒注意事項(xiàng)

 

　　1. 請(qǐng)?jiān)谑褂帽井a(chǎn)品前仔細(xì)閱讀說明書。本產(chǎn)品僅用于科研，不可用于診斷。

 

　　2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿戴實(shí)驗(yàn)防護(hù)服、手套、口罩等必要的防護(hù)裝備。

 

　　3. 每次使用前請(qǐng)檢查試劑是否出現(xiàn)沉淀。如果有沉淀，請(qǐng)?jiān)?7℃溫浴，溶解沉淀后再使用。如果有任何試劑出現(xiàn)變色或微生物污染即丟棄。

 

　　4. BCA法測(cè)定蛋白濃度時(shí)，吸光度會(huì)隨時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深，因此所有樣品的測(cè)定需在10分鐘內(nèi)完成，否則會(huì)影響蛋白定量的準(zhǔn)確度。

 

　　5. 待測(cè)樣品中如含有較高濃度的非離子型表面活性劑，普通Lowry法會(huì)因反應(yīng)液出現(xiàn)沉淀而無法檢測(cè)，BCA檢測(cè)法則不會(huì)有此情況發(fā)生，但是會(huì)導(dǎo)致待測(cè)樣品顯色反應(yīng)加深，仍將產(chǎn)生測(cè)定誤差。

 

　　6. 待測(cè)樣品中如含有鰲合劑，或處于強(qiáng)酸、強(qiáng)堿條件則會(huì)導(dǎo)致負(fù)吸收值。

 

　　7. 如含有脂類物質(zhì)會(huì)導(dǎo)致吸收值明顯升高。

 

　　8. 如因上述干擾因素存在，造成測(cè)定誤差，請(qǐng)通過稀釋、透析或其他處理方式，使干擾物質(zhì)濃度降至BCA檢測(cè)大兼容濃度以下，或選用聯(lián)科生物生產(chǎn)的抗干擾蛋白定量試劑盒直接進(jìn)行測(cè)定。

 

　　9. 如果酶標(biāo)儀沒有562 nm檢測(cè)波長(zhǎng)，540 - 590 nm之間的波長(zhǎng)也可接受。