MX80070.1 v.A

  細(xì)胞衰老特異性晚期脂褐素鐵還原法（SCHMORL）染色試劑盒產(chǎn)品說明書

（中文版）

主要用途

  細(xì)胞衰老特異性晚期脂褐素鐵還原法（SCHMORL）染色試劑是一種旨在使用鐵還原法技術(shù)，分析細(xì)胞樣品中晚期脂褐素沉積現(xiàn)象，從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到藍(lán)色表達(dá)的細(xì)胞作為細(xì)胞復(fù)制性衰老（replicative senescence）的分子特征來識別和探測衰老細(xì)胞的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良SCHMORL方法、成功實驗證明的。主要適用于動物細(xì)胞的晚期脂褐素檢測。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。  

技術(shù)背景

細(xì)胞復(fù)制性衰老是細(xì)胞控制其生長潛能的保障機(jī)制。衰老細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期，表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征，其中脂褐素顆粒聚集增多成為細(xì)胞衰老的特征性生物學(xué)標(biāo)記。脂褐素（lipofusin），又稱為“磨損（wear and tear）"色素，是一種細(xì)胞內(nèi)與年齡相關(guān)的棕黃色熒光胞漿顆粒色素，主要在有絲分裂后細(xì)胞的繼發(fā)性溶酶體內(nèi)。脂褐素常見于老年人的永恒性非分裂性組織細(xì)胞里，例如心臟、肝臟和神經(jīng)等，尤其在衰老誘導(dǎo)的細(xì)胞退變中聚集增多，特別是的組織。脂褐素來自于氧化的蛋白和脂質(zhì)，成為細(xì)胞衰老中后期的獨立指征。脂褐素分為早期和晚期，晚期脂褐素作為較強(qiáng)還原性物質(zhì)，在鐵離子的存在下，使鐵（ferricyanide）轉(zhuǎn)化為亞鐵（ferrocyanide），產(chǎn)生不可溶性普魯士藍(lán)（Prussian blue）產(chǎn)物，顯示藍(lán)色。

產(chǎn)品內(nèi)容

  清理液（Reagent A）              毫升

  固著液（Reagent B）          毫升

  染色液（Reagent C）          毫升

  酸性液（Reagent D）          毫升

產(chǎn)品說明書               1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；   染色液（Reagent C）避免光照；有效保證3月

用戶自備

小型染色缸：用于細(xì)胞染色操作

光學(xué)顯微鏡：用于觀察染色后的細(xì)胞

實驗步驟

操作一：細(xì)胞載玻片染色

1． 取出待測的細(xì)胞載玻片或細(xì)胞涂片 

2． 小心加上xx微升  清理液（Reagent A）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面

3． 小心移去載玻片上的  清理液（Reagent A）

4． 小心加上xx微升  固著液（Reagent B）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面

5． 在室溫下孵育5分鐘

6． 小心移去載玻片上的  固著液（Reagent B）

7． 小心加上xx微升  清理液（Reagent A），清洗樣品表面

8． 在室溫下孵育2分鐘

9． 小心移去載玻片上的  清理液（Reagent A）

10． 小心加上xx微升  染色液（Reagent C）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面

11． 在室溫下孵育10分鐘

12． 小心移去載玻片上的  染色液（Reagent C）

13． 小心將載玻片置入xx毫升  清理液（Reagent A）的小型染色缸里 

14． 室溫下孵育2分鐘

15． 取出載玻片，小心移去載玻片上的  清理液（Reagent A）

16． 小心加上xx微升  酸性液（Reagent D）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面

17． 在室溫下孵育5分鐘

18． 小心移去載玻片上的  酸性液（Reagent D）

19． 小心加上xx微升  清理液（Reagent A），清洗樣品表面

20． 小心移去載玻片上的  清理液（Reagent A）

21． （選擇步驟）復(fù)染（建議使用  核固紅復(fù)染試劑盒——   40011）

22． 放上蓋玻片或封片（水相或中性樹脂）

23． 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察（注意：參見注意事項3）：脂褐素陽性細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色，細(xì)胞核呈現(xiàn)紅色（如果復(fù)染）

操作二：24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色

1． 小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液

2． 每孔加入xx微升  清理液（Reagent A），清洗生長中的細(xì)胞表面

3． 小心抽去每孔里的  清理液（Reagent A）

4． 每孔加入xx微升  固著液（Reagent B），覆蓋整個生長表面

5． 在室溫下孵育5分鐘

6． 小心抽去每孔里的  固著液（Reagent B）

7． 每孔加入xx微升  清理液（Reagent A），清洗細(xì)胞表面

8． 在室溫下孵育2分鐘

9． 小心抽去  清理液（Reagent A）

10． 每孔加入xx微升  染色液（Reagent C），覆蓋整個生長表面

11． 在室溫下孵育10分鐘

12． 小心抽去  染色液（Reagent C）

13． 每孔加入xx微升  清理液（Reagent A），清洗細(xì)胞表面

14． 在室溫下孵育2分鐘

15． 小心抽去  清理液（Reagent A）

16． 重復(fù)實驗步驟13至15二次

17． 小心加上xx微升  酸性液（Reagent D），覆蓋整個生長表面

18． 室溫下孵育5分鐘

19． 小心抽去  酸性液（Reagent D）

20． 小心加入xx微升  清理液（Reagent A）

21． 小心抽去  清理液（Reagent A）

22． （選擇步驟）復(fù)染（建議使用  核固紅復(fù)染試劑盒— 40011）

23． 小心加入xx微升  清理液（Reagent A）

24． 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察（注意：參見注意事項3）：脂褐素陽性細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色，細(xì)胞核呈現(xiàn)紅色（如果復(fù)染）

注意事項

1． 本產(chǎn)品為50次（細(xì)胞載玻片）和25次（1個24孔板）操作

2． 本產(chǎn)品還可以染色其它還原性物質(zhì)，包括黑色素（melanin）、肝膽汁（liver bile）、腸嗜鉻細(xì)胞（enterochromaffin）等

3． 本產(chǎn)品不同于其它脂褐素組化染色，其基于生化反應(yīng)產(chǎn)生的顯色反應(yīng)，與樣品的關(guān)聯(lián)性很強(qiáng)。樣品的狀態(tài)，例如新鮮與否、置于空氣時長等，會嚴(yán)重影響染色效果

4． 操作時，須戴手套

5． 使用時，避免污染母液

6．   染色液（Reagent C）避免光照

7． 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面

8． 染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察

9． 本公司提供系列細(xì)胞衰老分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著色清晰