電泳儀技術(shù)是分子生物學研究*的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類,自由界面電泳不需支持物,如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等,這類電泳目前已很少使用。而區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物,常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G薄層等,分子生物學領(lǐng)域中常用的是瓊脂糖凝膠電泳。
所謂電泳,是指帶電粒子在電場中的運動,不同物質(zhì)由于所帶電荷及分子量的不同,因此在電場中運動速度不同,根據(jù)這一特征,應(yīng)用電泳儀便可以對不同物質(zhì)進行定性或定量分析,或?qū)⒁欢ɑ旌衔镞M行組份分析或單個組份提取制備,這在實驗研究中具有極其重要的意義。下面簡單介紹其使用方法、注意事項及常見問題的解決方法。
一、使用方法
1、首先用導(dǎo)線將電泳槽的兩個電極與電泳儀的直流輸出端聯(lián)接,注意極性不要接反。
2、電泳儀電源開關(guān)調(diào)至關(guān)的位置,電壓旋鈕轉(zhuǎn)到小,根據(jù)工作需要選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍。
3、接通電源,緩緩旋轉(zhuǎn)電壓調(diào)節(jié)旋鈕直到達到的所需電壓為止,設(shè)定電泳終止時間,此時電泳即開始進行。
4、工作完畢后,應(yīng)將各旋鈕、開關(guān)旋至零位或關(guān)閉狀態(tài),并撥出電泳插頭。
二、注意事項
1、電泳儀通電進入工作狀態(tài)后,禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分,也不能到電泳槽內(nèi)取放東西,如需要應(yīng)先斷電,以免觸電。同時要求儀器必須有良好接地端,以防漏電。
2、儀器通電后,不要隨時增加或撥掉輸出導(dǎo)線插頭,以防短路現(xiàn)象發(fā)生,雖然儀器內(nèi)部附設(shè)有保險絲,但短路現(xiàn)象仍有可能導(dǎo)致儀器損壞。
3、由于不同介質(zhì)支持物的電阻值不同,電泳時所通過的電流量也不同,其電泳動速度及電泳至終點所需時間也不同,故不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時在同一電泳儀上進行。
4、在總電流不超過儀器額定電流時(大電流范圍),可以多槽關(guān)聯(lián)使用,但要注意不能超載,否則容易影響儀器壽命。
5、某些特殊情況下需檢查儀器電泳輸入情況時,允許在穩(wěn)壓狀態(tài)下空載開機,但在穩(wěn)流狀態(tài)下必須先接好負載再開機,否則電壓表指針將大幅度跳動,容易造成不必要的人為機器損壞。
6、使用過程中發(fā)現(xiàn)異常現(xiàn)象,如較大噪音、放電或異常氣味,須立即切斷電源,進行檢修,以免發(fā)生意外事故。
三、常見問題及其解決方法
1、電泳儀的輸出為何達不到設(shè)定值?
答:①電泳儀的輸出狀態(tài)遵守“循歐姆定律”:電壓U=電流I×(電泳槽)電阻R相對不變的情況下,U、I、P(功率P=電流I×電壓U)中任意一個參數(shù)恒定,其他參數(shù)也隨之恒定;而任意一個參數(shù)變化,其他參數(shù)也隨之正比變化;②如果電泳儀的輸出電壓U達不到預(yù)置值,應(yīng)首先觀察I或P是否已經(jīng)恒定,或者已經(jīng)達到電泳儀所規(guī)定的大I或P(JY電泳儀均有明確指示燈標志)。如果尚未達到極限值,將已經(jīng)恒定I或P的設(shè)置調(diào)大(有必要的話限值),才能夠提高電壓輸出;③如果電泳儀的電流I達不到預(yù)置值,可調(diào)整電壓U或功率P;④如果電泳儀的功率P達不到預(yù)置值,可調(diào)整電壓U或電流I。
2、電腦控制電泳儀發(fā)生過壓報警現(xiàn)象,怎么辦?
答:①檢查是否空載使用;②是否電泳槽未加緩沖液;③是否電泳槽鉑金絲斷。
3、發(fā)生過流保護的原因?
答:①查是否存在電泳槽短路現(xiàn)象;②查緩沖液是否選錯。
4、發(fā)生漏電保護的原因?
答:①是否有液體濺入儀器內(nèi)部或輸出接口上;②是否有很多灰塵落入儀器內(nèi)部。
5、風機停轉(zhuǎn)或發(fā)出異響,怎么辦?
答:更換風機。
6、電壓、電流沒有輸出,怎么辦?
答:①檢查保險管是否損壞;②打開機箱檢查前面板輸出座與主板連接的插頭是否脫落;③檢查瓷罐變壓器的插頭是否脫落或用萬用表檢查每組兩端應(yīng)為通路。