冰凍切片Kat1抗原免疫組化染色試劑盒內(nèi)質(zhì)呈淡藍(lán)黑色，外質(zhì)收縮，剩下部分不著色或色澤更淺。圓形細(xì)胞核呈藍(lán)黑色。居中的核仁呈黑色小圓點(diǎn)。核膜較薄，其內(nèi)側(cè)緣均勻，整齊地排列著一層細(xì)小的染色質(zhì)粒。核仁與核膜之間可見(jiàn)到核網(wǎng)。被吞噬的紅細(xì)胞呈藍(lán)黑色采用蘇木素染色液進(jìn)行免疫染色后的復(fù)染，操作步驟簡(jiǎn)便，操作時(shí)間短。可以操作步驟簡(jiǎn)便，操作時(shí)間短或培養(yǎng)細(xì)胞的染色，或與免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光、原位雜交等配合使用。使用蘇木素染色液染色后還可以進(jìn)行免疫染色或其它染料的復(fù)染。

 

　　冰凍切片Kat1抗原免疫組化染色試劑盒時(shí)間的把握？

 

　?。?）蘇木素復(fù)染時(shí)間要看當(dāng)時(shí)的室溫、溶液的新舊、目標(biāo)抗原的定位等情況，一般數(shù)秒-數(shù)分鐘。不過(guò)這個(gè)如果染色不理想可以補(bǔ)救的。即：染色深則分化時(shí)間稍長(zhǎng)些即可；染色淺則再置于蘇木素中染色即可。

 

　　（2）鹽酸酒精是分化，氨水是返蘭。作用不同。片子復(fù)染完后流水振洗，然后置于鹽酸酒精中數(shù)秒（一定動(dòng)作要快）后拿出流水振洗，在放入氨水中返蘭即可。

 

　?。?）如果分化的顏色過(guò)淺，可以復(fù)置于蘇木素中染色。

 

　　線粒體是細(xì)胞中重要的細(xì)胞器，其主要功能是提供細(xì)胞內(nèi)各種物質(zhì)代謝所需要的能量。線粒體大量存在于代謝旺盛的細(xì)胞中，如動(dòng)物的心肌，肝，腎等器官和組織的細(xì)胞中。大量制備線粒體就是從這些器官組織中提取，或從組織培養(yǎng)細(xì)胞中提取。在光學(xué)顯微鏡下線粒體呈現(xiàn)為顆粒狀、棒狀或彎曲細(xì)線。線粒體熒光探針，是一種含有硫醇氯甲基基團(tuán)的熒光染料，自由通過(guò)細(xì)胞膜，選擇性地聚集在線粒體。它可以對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行直接染色，在580nm波長(zhǎng)可以清晰看到被染成紅色的線狀或顆粒小體的線粒體。并可以分析線粒體膜電位，以檢測(cè)線粒體活性。

 

　　冰凍切片細(xì)胞色素C氧化酶活性染色試劑盒是一種旨在通過(guò)長(zhǎng)波長(zhǎng)的熒光染料特異性地聚集在線粒體，并呈現(xiàn)紅色，用于分析和觀察線粒體活性與形態(tài)以及雙重染色或重疊染色定位的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種冰凍切片組織線粒體的形態(tài)觀察、活性探測(cè)和定位標(biāo)記。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，活體檢測(cè)，分辨率高，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，滯留持久。

 

　　線粒體是細(xì)胞中重要的細(xì)胞器，其主要功能是提供細(xì)胞內(nèi)各種物質(zhì)代謝所需要的能量。線粒體大量存在于代謝旺盛的細(xì)胞中，如動(dòng)物的心肌，肝，腎等器官和組織的細(xì)胞中。大量制備線粒體就是從這些器官組織中提取，或從組織培養(yǎng)細(xì)胞中提取。在光學(xué)顯微鏡下線粒體呈現(xiàn)為顆粒狀、棒狀或彎曲細(xì)線。線粒體熒光探針，是一種含有硫醇氯甲基基團(tuán)的熒光染料，自由通過(guò)細(xì)胞膜，選擇性地聚集在線粒體。它可以對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行直接染色，在580nm波長(zhǎng)可以清晰看到被染成紅色的線狀或顆粒小體的線粒體。并可以分析線粒體膜電位，以檢測(cè)線粒體活性。

 

　　冰凍切片Kat1抗原免疫組化染色試劑盒染色原理：

 

　　1、細(xì)胞核染色的原理：

 

　　蘇木素為堿性天然染料，可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA，在DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。

 

　　2、細(xì)胞漿染色的原理：

 

　　伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料，在一定條件下可使細(xì)胞漿著色。細(xì)胞漿的主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物，細(xì)胞漿的染色與染液的pH值密切相關(guān)。當(dāng)染液的pH值在胞漿蛋白質(zhì)等電點(diǎn)以下時(shí)，胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離，則細(xì)胞漿帶正電荷，就可被帶負(fù)電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，與胞漿蛋白質(zhì)帶正電荷的陽(yáng)離子結(jié)合，使細(xì)胞漿著色，呈現(xiàn)紅色。

 

　　本文是小編自己準(zhǔn)備的關(guān)于人凝血因子Ⅲelisa試劑盒的操作步驟經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，以作為參考希望能夠幫助到大家。

 

　　1、人凝血因子Ⅲelisa試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉；

 

　　2、加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻；

 

　　3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘；

 

　　4、配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用；

 

　　5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干；

 

　　6、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外；

 

　　7、溫育：操作同3；

 

　　8、洗滌：操作同5；

 

　　9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘；

 

　　10、人凝血因子Ⅲelisa試劑盒的終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）；

 

　　11、測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值，測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

 

　　冰凍切片Kat1抗原免疫組化染色試劑盒的操作步驟

 

　　1、準(zhǔn)備：從冰箱取出小鼠核因子κB受體活化因子配基試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

 

　　2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

 

　　3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對(duì)照孔不加。

 

　　4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

 

　　5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板）。

 

　　6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL，空白對(duì)照孔不加。

 

　　7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

 

　　8、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板）。

 

　　9、顯色：每孔先加入顯色劑A液50μL，再加入顯色劑B液50μL，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s），37℃避光顯色15min。

 

　　10、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

 

　　11、測(cè)定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值（OD值）。

 

　　12、冰凍切片Kat1抗原免疫組化染色試劑盒計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算，zui終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。